Javascript қазір браузеріңізде өшірілген.Javascript өшірілгенде, бұл веб-сайттың кейбір функциялары жұмыс істемейді.
Хавьер Фидалго, * Пьер-Антуан Деглесне, * Родриго Арройо, * Лилиан Сепульведа, * Евгения Раннева, Филипп Депрес ғылым бөлімі, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Каталония, Испания * Бұл авторлардың бұл жұмыс туралы кейбір түсініктері бар. үлес фоны: Гиалурон қышқылы (HA) – эстетикалық мақсатта тері толтырғыштарын өндіруде қолданылатын табиғи полисахарид.Адам тіндерінде оның жартылай шығарылу кезеңі бірнеше күн болғандықтан, HA негізіндегі тері толтырғыштары олардың ағзадағы өмірін ұзарту үшін химиялық түрде өзгертілген.Коммерциялық HA негізіндегі толтырғыштардағы ең көп тараған модификация 1,4-бутандиол диглицидил эфирін (BDDE) HA тізбектерін айқастыру үшін айқастырғыш агент ретінде пайдалану болып табылады.Қалдық немесе реакцияға түспеген BDDE улы емес болып саналады <2/миллион бөлік (ppm);сондықтан соңғы тері толтырғышындағы қалдық BDDE пациенттің қауіпсіздігін қамтамасыз ету үшін сандық түрде анықталуы керек.Материалдар мен әдістер: Бұл зерттеу сұйық хроматография мен масс-спектрометрияны (LC-MS) біріктіру арқылы сілтілі жағдайларда BDDE және HA арасындағы айқаспалы байланыс реакциясының жанама өнімін анықтау және сипаттауды сипаттайды.Нәтижелер: Әртүрлі талдаулардан кейін HA-BDDE гидрогелі дезинфекциялау үшін қолданылатын сілтілі жағдайлар мен жоғары температура осы жаңа жанама өнім, «пропиленгликоль тәрізді» қосылыс түзілуіне ықпал еткені анықталды.LC-MS талдауы жанама өнімнің BDDE сияқты моноизотоптық массасы, басқа ұстау уақыты (tR) және басқа УК жұту (λ=200 нм) режимі бар екенін растады.BDDE-ден айырмашылығы, LC-MS талдауында бірдей өлшеу жағдайында бұл жанама өнімнің 200 нм-де анықтау жылдамдығы жоғары екені байқалды.Қорытынды: Бұл нәтижелер осы жаңа қосылыстың құрылымында эпоксид жоқ екенін көрсетеді.Пікірталас коммерциялық мақсатта HA-BDDE гидрогелі (HA тері толтырғышы) өндірісінде табылған осы жаңа жанама өнімнің қаупін бағалау үшін ашық.Түйінді сөздер: гиалурон қышқылы, HA тері толтырғышы, айқаспалы гиалурон қышқылы, BDDE, LC-MS талдауы, BDDE қосалқы өнімі.
Гиалурон қышқылына (HA) негізделген толтырғыштар косметикалық мақсаттарда қолданылатын ең көп таралған және танымал тері толтырғыштары болып табылады.1 Бұл тері толтырғышы әдетте >95% су мен 0,5-3% ГА-дан тұратын гидрогель болып табылады, бұл оларға гель тәрізді құрылым береді.2 ГА – полисахарид және омыртқалылардың жасушадан тыс матрицасының негізгі компоненті.Ингредиенттердің бірі.Ол гликозидтік байланыстармен байланысқан (1,4)-глюкурон қышқылы-β (1,3)-N-ацетилглюкозамин (GlcNAc) қайталанатын дисахаридтік бірліктерден тұрады.Бұл дисахаридтік үлгі барлық организмдерде бірдей.Кейбір ақуызға негізделген толтырғыштармен (мысалы, коллаген) салыстырғанда, бұл қасиет HA-ны жоғары биоүйлесімді молекулаға айналдырады.Бұл толтырғыштар пациенттің иммундық жүйесі тануы мүмкін аминқышқылдарының реттілігінің ерекшелігін көрсете алады.
Тері толтырғышы ретінде пайдаланылған кезде, HA негізгі шектеуі гиалуронидазалар деп аталатын ферменттердің белгілі бір тобының болуына байланысты оның тіндер ішінде жылдам айналымы болып табылады.Осы уақытқа дейін ұлпалардағы HA жартылай шығарылу кезеңін арттыру үшін HA құрылымындағы бірнеше химиялық модификациялар сипатталған.3 Бұл модификациялардың көпшілігі гиалуронидазаның полисахаридті полимерлерге қол жеткізуін HA тізбектерін айқастыру арқылы азайтуға тырысады.Сондықтан, HA құрылымы мен кросс-байланыстырушы агент арасындағы көпірлер мен молекулааралық коваленттік байланыстардың пайда болуына байланысты, көлденең байланысқан HA гидрогелі табиғи HA-ға қарағанда ферменттердің ыдырауына қарсы өнімдерді шығарады.4-6
Осы уақытқа дейін айқаспалы HA өндіру үшін қолданылатын химиялық айқастырғыш агенттерге метакриламид, 7 гидразид, 8 карбодимид, 9 дивинилсульфон, 1,4-бутандиол диглицидил эфирі (BDDE) және поли(этиленгликоль) диглицидил эфирі жатады.10 ,11 BDDE қазіргі уақытта ең жиі қолданылатын айқас байланыстыру агенті болып табылады.Гидрогельдердің бұл түрлері ондаған жылдар бойы қауіпсіз екендігі дәлелденсе де, қолданылатын айқаспалы агенттер цитотоксикалық және кейбір жағдайларда мутагенді болуы мүмкін реактивті реагенттер болып табылады.12 Сондықтан соңғы гидрогельдегі олардың қалдық мөлшері жоғары болуы керек.Қалдық концентрациясы миллионға 2 бөліктен (ppm) аз болса, BDDE қауіпсіз болып саналады.4
Газ хроматографиясы, масс-спектрометриямен (MS) біріктірілген өлшемді алып тастау хроматографиясы, ядролық магниттік-резонанстық (ЯМР) флуоресценцияны өлшеу әдістері және HA гидрогельдеріндегі төмен қалдық BDDE концентрациясын, айқаспалы байланыс дәрежесін және алмастыру орнын анықтаудың бірнеше әдістері бар. Диодтық массив біріктірілген жоғары өнімді сұйықтық хроматографиясы (HPLC).13-17 Бұл зерттеу сілтілі жағдайларда BDDE және HA реакциясы нәтижесінде алынған соңғы кросс-байланыстырылған HA гидрогельіндегі жанама өнімнің анықталуы мен сипаттамасын сипаттайды.HPLC және сұйық хроматография-масс-спектрометрия (LC-MS талдау).BDDE осы жанама өнімінің уыттылығы белгісіз болғандықтан, оның қалдық мөлшерін анықтауды әдетте соңғы өнімде BDDE-де орындалатын әдіске ұқсас жолмен анықтауды ұсынамыз.
Алынған HA натрий тұзының (Shiseido Co., Ltd., Токио, Жапония) молекулалық салмағы ~1 368 000 Да (Лоран әдісі) 18 және меншікті тұтқырлығы 2,20 м3/кг.Айқас байланыстыру реакциясы үшін BDDE (≥95%) Sigma-Aldrich Co. (Сент-Луис, МО, АҚШ) компаниясынан сатып алынды.рН 7,4 фосфатты буферлік тұзды ерітінді Sigma-Oldrich компаниясынан сатып алынды.LC-MS талдауында қолданылатын барлық еріткіштер, ацетонитрил және су HPLC маркалы сапада сатып алынды.Құмырсқа қышқылы (98%) реагент ретінде сатып алынады.
Барлық эксперименттер UPLC Acquity жүйесінде (Waters, Milford, MA, АҚШ) орындалды және электроспрей иондау көзімен жабдықталған API 3000 үштік төрт полюсті масс-спектрометрге қосылды (AB SCIEX, Framingham, MA, АҚШ).
1% сілтінің (натрий гидроксиді, NaOH) қатысуымен 10% (сал/сал) натрий гиалуронат (NaHA) ерітіндісіне 198 мг BDDE қосу арқылы айқаспалы HA гидрогельдерінің синтезі басталды.Реакция қоспасындағы соңғы BDDE концентрациясы 9,9 мг/мл (0,049 мМ) болды.Содан кейін реакция қоспасы мұқият араласып, гомогенизацияланды және 45°C температурада 4 сағат бойы жүруге рұқсат етілді.19 Реакцияның рН мәні ~12 деңгейінде сақталады.
Содан кейін реакция қоспасы сумен жуылды, ал соңғы HA-BDDE гидрогелі сүзілді және 10-нан 25 мг/мл-ге дейінгі HA концентрациясына және 7,4 соңғы рН мәніне жету үшін PBS буферімен сұйылтылды.Өндірілген айқаспалы HA гидрогельдерін зарарсыздандыру үшін осы гидрогельдердің барлығы автоклавталады (120°С 20 минут бойы).Тазартылған BDDE-HA гидрогелі талдауға дейін 4°C температурада сақталады.
Айқас байланысқан HA өніміндегі BDDE талдауы үшін 240 мг үлгі өлшеніп, орталық тесікке енгізілді (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, АҚШ; көлемі 0,5 мл) және бөлме температурасында 10 000 айн/мин центрифугадан өтті. 10 минут.Барлығы 20 мкл төмен түсетін сұйықтық жиналып, талданды.
BDDE стандартын (Sigma-Aldrich Co) сілтілі жағдайларда (1%, 0,1% және 0,01% NaOH) талдау үшін, егер келесі шарттар орындалса, сұйық үлгі 1:10, 1:100 немесе дейін 1:1 000 000 Қажет болса, талдау үшін MilliQ деионизацияланған суды пайдаланыңыз.
Айқас байланыстыру реакциясында пайдаланылатын бастапқы материалдар үшін (HA 2%, H2O, 1% NaOH және 0,049 мМ BDDE) осы материалдардан дайындалған әрбір үлгінің 1 мл бірдей талдау шарттарын пайдалана отырып талданды.
Иондық картада пайда болатын шыңдардың ерекшелігін анықтау үшін 20 мкл үлгіге 10 мкл 100 ppb BDDE стандартты ерітіндісі (Sigma-Aldrich Co) қосылды.Бұл жағдайда әрбір үлгідегі стандарттың соңғы концентрациясы 37 ppb құрайды.
Алдымен, 10 мкл стандартты BDDE (Sigma-Aldrich Co) 990 мкл MilliQ суымен (тығыздығы 1,1 г/мл) сұйылту арқылы 11 000 мг/л (11 000 ppm) концентрациясы бар BDDE қор ерітіндісін дайындаңыз.Аралық стандартты сұйылту ретінде 110 мкг/л (110 ppb) BDDE ерітіндісін дайындау үшін осы ерітіндіні пайдаланыңыз.Содан кейін 75, 50, 25, 10 және 1 ppb қажетті концентрацияға жету үшін аралық сұйылтқышты бірнеше рет сұйылту арқылы стандартты қисық сызығын дайындау үшін аралық BDDE стандартты еріткішін (110 ppb) пайдаланыңыз.1-суретте көрсетілгендей, 1,1-ден 110 ppb-ге дейінгі BDDE стандартты қисығының жақсы сызықтық (R2>0,99) бар екені анықталды.Стандартты қисық төрт тәуелсіз экспериментте қайталанды.
1-сурет Жақсы корреляция байқалатын LC-MS талдауы арқылы алынған BDDE стандартты калибрлеу қисығы (R2>0,99).
Қысқартулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфирі;LC-MS, сұйық хроматография және масс-спектрометрия.
Айқас байланысқан HA-да бар BDDE стандарттарын және негізгі шешімдегі BDDE стандарттарын анықтау және сандық анықтау үшін LC-MS талдауы қолданылды.
Хроматографиялық бөлу LUNA 2,5 мкм C18(2)-HST бағанында (50×2,0 мм2; Phenomenex, Torrance, CA, АҚШ) қол жеткізілді және талдау кезінде бөлме температурасында (25°C) ұсталды.Жылжымалы фаза ацетонитрилден (еріткіш А) және құрамында 0,1% құмырсқа қышқылы бар судан (еріткіш В) тұрады.Мобильді фаза градиенттік элюция арқылы элюцияланады.Градиент келесідей: 0 минут, 2% A;1 минут, 2% A;6 минут, 98% A;7 минут, 98% A;7,1 минут, 2% А;10 минут , 2% A. Жұмыс уақыты 10 минут және инъекция көлемі 20 мкл.BDDE сақтау уақыты шамамен 3,48 минутты құрайды (тәжірибелер негізінде 3,43-тен 4,14 минутқа дейін).Жылжымалы фаза LC-MS талдауы үшін 0,25 мл/мин ағын жылдамдығымен айдалды.
BDDE талдауы және MS арқылы сандық анықтау үшін UPLC жүйесі (Сулар) электроспрей иондау көзімен жабдықталған API 3000 үш төрт полюсті масс-спектрометрімен (AB SCIEX) біріктіріліп, талдау оң ион режимінде (ESI+) орындалады.
BDDE-де орындалған ион фрагменті талдауына сәйкес, ең жоғары қарқынды фрагмент 129,1 Да-ға сәйкес келетін фрагмент болып анықталды (6-сурет).Сондықтан сандық анықтау үшін көп ионды бақылау режимінде (MIM) BDDE массалық түрлендіруі (массаның зарядқа қатынасы [м/з]) 203,3/129,1 Да құрайды.Ол сонымен қатар LC-MS талдауы үшін толық сканерлеу (FS) режимін және өнімді ионды сканерлеу (PIS) режимін пайдаланады.
Әдістің ерекшелігін тексеру үшін бос үлгі (бастапқы жылжымалы фаза) талданды.203,3/129,1 Да массалық түрлендірумен бос үлгіде сигнал анықталған жоқ.Тәжірибенің қайталану мүмкіндігіне қатысты 55 ppb (калибрлеу қисығының ортасында) 10 стандартты инъекцияға талдау жасалды, нәтижесінде қалдық стандартты ауытқу (RSD) <5% (деректер көрсетілмеген).
Қалдық BDDE мазмұны төрт тәуелсіз экспериментке сәйкес келетін сегіз түрлі автоклавталған BDDE кросс-байланыстырылған HA гидрогельдерінде сандық түрде анықталды.«Материалдар мен әдістер» бөлімінде сипатталғандай, сандық анықтау BDDE стандартты сұйылтудың регрессия қисығының орташа мәнімен бағаланады, ол BDDE массалық ауысуында 203,3/129,1 Да, ұстап тұру кезінде анықталған бірегей шыңға сәйкес келеді. уақыт 3,43-тен 4,14 минутқа дейін Күтпейді.2-суретте 10 ppb BDDE анықтамалық стандартының мысал хроматограммасы көрсетілген.1-кестеде сегіз түрлі гидрогельдердің қалдық BDDE мазмұны жинақталған.Мән диапазоны 1 мен 2,46 ppb.Сондықтан үлгідегі қалдық BDDE концентрациясы адам пайдалануы үшін қолайлы (<2 ppm).
2-сурет 203,30/129,10 Да (оң MRM режимінде) LC-MS талдауы арқылы алынған 10 ppb BDDE анықтамалық стандартының (Sigma-Aldrich Co), MS (m/z) ауысуының иондық хроматограммасы.
Қысқартулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфирі;LC-MS, сұйық хроматография және масс-спектрометрия;MRM, бірнеше реакцияларды бақылау;MS, массасы;м/з, массаның зарядқа қатынасы.
Ескертпе: 1-8 үлгілері автоклавталған BDDE айқаспалы HA гидрогельдері болып табылады.Гидрогельдегі BDDE қалдық мөлшері және BDDE сақтау уақытының шыңы туралы да хабарланады.Соңында, әртүрлі сақтау уақыттары бар жаңа шыңдардың болуы туралы да хабарланады.
Қысқартулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфирі;HA, гиалурон қышқылы;MRM, бірнеше реакцияларды бақылау;tR, сақтау уақыты;LC-MS, сұйық хроматография және масс-спектрометрия;RRT, салыстырмалы сақтау уақыты.
Бір таңқаларлығы, LC-MS иондық хроматограммасының талдауы талданған барлық автоклавталған кросс-байланыстырылған HA гидрогель үлгілерінің негізінде 2,73-тен 3,29 минутқа дейінгі қысқа ұстау уақытында қосымша шыңның болғанын көрсетті.Мысалы, 3-суретте көлденең байланысқан HA үлгісінің иондық хроматограммасы көрсетілген, мұнда қосымша шың шамамен 2,71 минуттық басқа ұстау уақытында пайда болады.Жаңадан байқалған шың мен BDDE шыңы арасындағы байқалған салыстырмалы ұстау уақыты (RRT) 0,79 болып табылды (1-кесте).Біз жаңадан байқалған шыңның LC-MS талдауында пайдаланылған C18 бағанында аз сақталатынын білетіндіктен, жаңа шың BDDE-ге қарағанда көбірек полярлы қосылысқа сәйкес келуі мүмкін.
3-сурет LC-MS (MRM массалық түрлендіру 203,3/129,0 Да) арқылы алынған айқаспалы HA гидрогель үлгісінің иондық хроматограммасы.
Қысқартулар: HA, гиалурон қышқылы;LC-MS, сұйық хроматография және масс-спектрометрия;MRM, бірнеше реакцияларды бақылау;RRT, салыстырмалы сақтау уақыты;tR, сақтау уақыты.
Байқалған жаңа шыңдардың бастапқыда пайдаланылған шикізатта болатын ластаушы заттар болуы мүмкіндігін жоққа шығару үшін бұл шикізаттар да сол LC-MS талдау әдісі арқылы талданған.Талданатын бастапқы материалдарға су, судағы 2% NaHA, судағы 1% NaOH және кросс-байланыс реакциясында қолданылатын бірдей концентрациядағы BDDE кіреді.Пайдаланылған бастапқы материалдың иондық хроматограммасы ешқандай қосылысты немесе шыңды көрсетпеді және оның сақталуы уақыты байқалған жаңа шыңға сәйкес келеді.Бұл факт тек бастапқы материалда талдау процедурасына кедергі келтіруі мүмкін кез келген қосылыстар немесе заттар болуы мүмкін емес, бірақ басқа зертханалық өнімдермен ықтимал айқаспалы ластану белгілері жоқ деген идеяны жоққа шығарады.BDDE және жаңа шыңдардың LC-MS талдауынан кейін алынған концентрация мәндері 2-кестеде (1-4 үлгілер) және ион хроматограммасы 4-суретте көрсетілген.
Ескертпе: 1-4 үлгілері автоклавталған BDDE кросс-байланыстырылған HA гидрогельдерін өндіру үшін пайдаланылатын шикізатқа сәйкес келеді.Бұл үлгілер автоклавталмаған.
Қысқартулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфирі;HA, гиалурон қышқылы;LC-MS, сұйық хроматография және масс-спектрометрия;MRM, бірнеше реакцияны бақылау.
4-сурет HA және BDDE кросс-байланыстыру реакциясында қолданылатын шикізат үлгісінің LC-MS хроматограммасына сәйкес келеді.
Ескерту: Бұлардың барлығы бірдей концентрацияда және айқаспалы байланыс реакциясын жүзеге асыру үшін қолданылатын қатынаста өлшенеді.Хроматограмма арқылы талданатын шикізаттың сандары сәйкес келеді: (1) су, (2) 2% ГА сулы ерітіндісі, (3) 1% NaOH сулы ерітіндісі.LC-MS талдауы 203,30/129,10 Да массалық түрлендіру үшін орындалады (оң MRM режимінде).
Қысқартулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфирі;HA, гиалурон қышқылы;LC-MS, сұйық хроматография және масс-спектрометрия;MRM, бірнеше реакцияны бақылау.
Жаңа шыңдардың қалыптасуына себепші болған жағдайлар зерттелді.Көлденең байланысқан HA гидрогельін өндіру үшін қолданылатын реакция жағдайлары BDDE кросс-байланыстырушы агентінің реактивтілігіне қалай әсер ететінін, жаңа шыңдардың (мүмкін жанама өнімдер) пайда болуына әкелетінін зерттеу үшін әртүрлі өлшеулер жүргізілді.Бұл анықтауларда біз NaOH әртүрлі концентрацияларымен (0%, 1%, 0,1% және 0,01%) сулы ортада өңделген, содан кейін автоклавтау немесе автоклавсыз өңделген соңғы BDDE кросс-байланыстырушысын зерттедік және талдадық.Бактериялардың бірдей жағдайларды имитациялау процедурасы айқаспалы HA гидрогельін өндіру үшін қолданылатын әдіспен бірдей.«Материалдар мен әдістер» бөлімінде сипатталғандай, үлгінің массалық ауысуы LC-MS арқылы 203.30/129.10 Да-ға талданды.BDDE және жаңа шыңның концентрациясы есептеліп, нәтижелер 3-кестеде көрсетілген. Ерітіндіде NaOH болуына қарамастан, автоклавталмаған үлгілерде жаңа шыңдар анықталған жоқ (1-4 үлгілер, кесте. 3).Автоклавталған үлгілер үшін жаңа шыңдар ерітіндіде NaOH болған кезде ғана анықталады, ал шыңның пайда болуы ерітіндідегі NaOH концентрациясына байланысты сияқты (5-8 үлгілер, 3 кесте) (RRT = 0,79).5-суретте NAOH бар немесе жоқ кезде автоклавталған екі үлгіні көрсететін ион хроматограммасының мысалы көрсетілген.
Қысқартулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфирі;LC-MS, сұйық хроматография және масс-спектрометрия;MRM, бірнеше реакцияны бақылау.
Ескертпе: Жоғарғы хроматограмма: Үлгі 0,1% NaOH сулы ерітіндісімен өңделіп, автоклавталады (20 минут бойы 120°C).Төменгі хроматограмма: үлгі NaOH-мен өңделмеген, бірақ бірдей жағдайларда автоклавта жасалған.203,30/129,10 Да массалық түрлендіру (оң MRM режимінде) LC-MS арқылы талданды.
Қысқартулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфирі;LC-MS, сұйық хроматография және масс-спектрометрия;MRM, бірнеше реакцияны бақылау.
Барлық автоклавталған үлгілерде, NaOH бар немесе онсыз BDDE концентрациясы айтарлықтай төмендеді (16,6 есеге дейін) (5-8 үлгілер, 2-кесте).BDDE концентрациясының төмендеуі жоғары температурада судың BDDE эпоксидті сақинасын 1,2-диолды қосылыс түзу үшін ашу үшін негіз (нуклеофил) ретінде әрекет ете алатындығына байланысты болуы мүмкін.Бұл қосылыстың моноизотоптық сапасы BDDE сапасынан ерекшеленеді, сондықтан оған әсер етпейді.LC-MS 203,30/129,10 Да массалық ығысуды анықтады.
Ақырында, бұл тәжірибелер жаңа шыңдардың генерациясы BDDE, NAOH және автоклавтау процесіне байланысты екенін көрсетеді, бірақ HA-ға ешқандай қатысы жоқ.
Шамамен 2,71 минут ұстау уақытында табылған жаңа шыңы содан кейін LC-MS сипатталды.Осы мақсатта BDDE (9,9 мг/мл) 1% NaOH сулы ерітіндісінде инкубацияланды және автоклавталады.4-кестеде жаңа шыңның сипаттамалары белгілі BDDE анықтамалық шыңымен салыстырылады (ұстау уақыты шамамен 3,47 минут).Екі шыңның иондық фрагментация талдауына сүйене отырып, 2,72 минут ұстау уақыты бар шың BDDE шыңы сияқты, бірақ қарқындылығы әртүрлі фрагменттерді көрсетеді деген қорытынды жасауға болады (6-сурет).Ұстау уақытына (PIS) 2,72 минут сәйкес келетін шың үшін 147 Да массадағы фрагментациядан кейін неғұрлым қарқынды шыңы байқалды.Осы анықтауда пайдаланылған BDDE концентрациясында (9,9 мг/мл) хроматографиялық бөлуден кейін ультракүлгін спектрдегі әртүрлі сіңіру режимдері (УК, λ=200 нм) де байқалды (7-сурет).Ұстау уақыты 2,71 минут болатын шың әлі де 200 нм-де көрінеді, ал BDDE шыңы бірдей жағдайларда хроматограммада байқалмайды.
4-кесте Сақтау уақыты шамамен 2,71 минут болатын жаңа шыңның және 3,47 минуттық сақтау уақытымен BDDE шыңының сипаттамасының нәтижелері
Ескерту: Осы нәтижелерді алу үшін екі шыңда LC-MS және HPLC талдаулары (MRM және PIS) орындалды.HPLC талдауы үшін 200 нм толқын ұзындығы бар ультракүлгін анықтау қолданылады.
Қысқартулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфирі;HPLC, жоғары өнімді сұйықтық хроматографиясы;LC-MS, сұйық хроматография және масс-спектрометрия;MRM, бірнеше реакцияларды бақылау;м/з, массаның зарядқа қатынасы;PIS, өнімнің иондарын сканерлеу;ультракүлгін сәуле, ультракүлгін сәуле.
Ескерту: Масса фрагменттері LC-MS талдауы (PIS) арқылы алынған.Жоғарғы хроматограмма: BDDE стандартты үлгі фрагменттерінің массалық спектрі.Төменгі хроматограмма: Жаңа шыңның массалық спектрі анықталды (BDDE шыңымен байланысты RRT 0,79).BDDE 1% NaOH ерітіндісінде өңделіп, автоклавталады.
Қысқартулар: BDDE, 1,4-бутандиол диглицидил эфирі;LC-MS, сұйық хроматография және масс-спектрометрия;MRM, бірнеше реакцияларды бақылау;PIS, өнімді ионды сканерлеу;RRT, салыстырмалы сақтау уақыты.
7-сурет 203,30 Да прекурсор ионының иондық хроматограммасы және (A) 2,71 минут ұстау уақытымен жаңа шыңы және (B) 200 нм кезінде 3,46 минутта BDDE анықтамалық стандарт шыңының ультракүлгін сәулесін анықтау.
Барлық өндірілген кросс-байланыстырылған HA гидрогельдерінде LC-MS сандық анықтаудан кейін қалдық BDDE концентрациясы <2 ppm болғаны байқалды, бірақ талдауда жаңа белгісіз шыңы пайда болды.Бұл жаңа шың BDDE стандартты өніміне сәйкес келмейді.BDDE стандартты өнімі де оң MRM режимінде бірдей сапаны түрлендіру (MRM түрлендіру 203,30/129,10 Да) талдауынан өтті.Әдетте, хроматография сияқты басқа аналитикалық әдістер гидрогельдерде BDDE анықтау үшін шекті сынақтар ретінде пайдаланылады, бірақ максималды анықтау шегі (LOD) 2 ppm-ден сәл төмен.Екінші жағынан, осы уақытқа дейін ЯМР және MS айқас байланысқан HA өнімдерінің қант бірлік фрагменттеріндегі HA-ның кросс-байланыс және/немесе модификация дәрежесін сипаттау үшін қолданылған.Бұл әдістердің мақсаты ешқашан осы мақалада сипатталғандай төмен концентрациялардағы қалдық BDDE анықтауды сандық түрде анықтау болған емес (біздің LC-MS әдісіміздің LOD = 10 ppb).
Жіберу уақыты: 01.09.2021 ж